Fosforylering av - Upprening och Anrikning av Fosfopeptider

Undersökning av fosforylering av proteiner spelar en viktig roll inom forskningen för att belysa många cellulära fenomen och är grundläggande i processen som reglerar celldifferentiering, tillväxt och migration. Vid analys av fosfopeptider i proteiner kan fosfopeptiderna vara svåra att detektera med MS på grund av de små mängderna och låg joniseringseffektivitet. Därför är anrikning av fosfopeptider liksom exkludering av icke-fosforylerade peptider avgörande för korrekt analys med LC/MS.

För att lösa detta problem erbjuder GL Sciences Titansphere-serien, som är optimerad för rening och koncentration av fosfopeptider med hjälp av titandioxid (titania) för att specifikt adsorbera fosfopeptider. GL Sciences titandioxidprodukter har visat sig vara den mest effektiva metoden för anrikning av fosfopeptider före LC/MS-analys och kan delvis ersätta IMAC som den primära metoden för förbehandling av fosfopeptidprover. Anrikning med titandioxid och IMAC är dock fortfarande kompletterande tekniker och används ofta i kombination för att få en optimal fosfopeptidanalys.

>> Phosphorylation Purification & Enrichment

Titansphere TiO Bulk material (Titan Dioxid)

TitanSphere TiO är en titandioxid partiklar (TiO2) som syntetiserats till enhetliga porösa sfäriska partiklar som selektivt kan koncentrera och rena fosfopeptider.
Bulkmaterial 5µm och 10µm, 500mg, s. 90

Titansphere Phos-TiO Kit

Detta kit innehåller patroner / tippar packade med Titandioxid, dedikerad buffert och protokoll för upparbetningen. Patronerna är optimerade för Phos-TiO-kitet för att förbättra adsorptionskapaciteten och den effektiva reningen och koncentrationen av fosfopeptider. Phos-TiO finns i två storlekar, 1mg/10µl med kapacitet på 1.2µg och 3mg/200µl med kapacitet på 3.5µg. För flera olika fosforylerade peptider finns Phos-TiO MP-kitet lämpligt för rening och anrikning av dessa.

Hög selektivitet -  Tack vare den höga affiniteten för peptider som innehåller fosfatgrupper kan fosfopeptider detekteras med MS även i cellextrakt som innehåller små mängder fosfopeptider.

Enkel användning -  Processen består av endast fem steg och provet renas och koncentreras på kort tid, en drifttid på endasy 40 minuter. Varje steg utförs enbart med centrifugering. Därför minimeras risken för mänskliga fel och systemet kan enkelt användas av vem som helst.

Flexibelt -  få eller många prover kan enkelt hanteras. Eftersom patronerna / tipparna är fristående kan experiment utföras för ett prov eller många prover samtidigt med hjälp av centrifugaladapter (säljs separat). >> Länk till centrifugeringsadapter
För större prover finns större patroner (60µg och 120µg) med högre laddningskapacitet för selektiv extraktion och koncentration av fosforylerade peptider. Från konditionering till eluering kan processen utföras med centrifugering. 

Princip
Titandioxid antas adsorbera fosfatgrupper med hög affinitet. GL Sciences rekommenderar reningsmetod med en mjölksyrelösning för att förhindra adsorption av icke-fosforylerade peptider eftersom mjölksyran binder till de återstående aktiva siterna och hämmar bindningen till karboxylgrupper.

MonoTip TiO

MonoTip TiO är en pipettspets packad med silika monolit bestruken med titandioxid som kan användas för att extrahera fosfopeptider. Genom att använda MonoTip TiO för att selektivt extrahera fosforylerade peptider kan detektionsgränsen förbättras och analystiden kan minskas.

Peptider kan enkelt renas med MonoTip TiO genom pipettering. Provvolym: 50-200 µl. Kapaciteten är 5 µg fosfopeptid och eluatet kan koncentreras genom reduktion.